獣医染色法・簡易検査法

部位　　ムチンでコートされていない角結膜上皮細胞を染色。 和光特級　184-00272 ローズベンガル1.0gを生理食塩水100mlで溶解 0.45μｎメンブランフィルターで濾過（真菌、ウィルスまで濾過） 115℃　30分高圧蒸気滅菌 有効　３ケ月 ムチンを染める。刺激性あり。細胞障害性もある。眼洗浄をよくすること。ピンクに染まる。楊子の先をたらす位 。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

部位　フロオレセイン　角膜上皮の欠損部位または結合の弱い細胞間隙を染色 部位　ローズベンガル染色　ムチンでコートされていない角結膜上皮細胞を染色。 生理食塩水45ml 10%フルオレサイド注射　5ml ローズベンガル500mg 0.22μｎメンブランフィルター（細菌まで濾過）で加圧濾過 冷所保存 使用時２μlをたらす。BUTもはかる。 有効３ヶ月　フロオレセインは長期置くとカビが生えやすい。

フルオルの試験紙にローズベンガル液を１滴たらし眼表面を染色する。ただしフルオル試験紙の濾紙がをつけた眼表面 はアーティファクトでローズベンガル陽性にそまる。 フルオルをしてからローズベンガルをしてもよいが、動物があきてしまいローズベンガルはできないことが多い。そのため同時に染色してしまう方法がとられるようになった。

血液塗末の赤血球　白血球　血小板を染色

1.ライト液　４０滴　1ml

2.pH6.4のバッファー5ml

3.ギムザ液　15滴　0.6ml

4.バッファー　3.3mlいれて合計10ml

メタノール　1ml　３分固定 ライトギムザ30分間染色　リンパ節は45分　 作り置きはしないこと　　　　　　　　　　

便の中性脂肪をそめる 　70％アルコール100mlにスダン�｡を1-2g加え、よくふり密栓して56-58℃に一晩おく、できた液は過飽和状態になっている。室温に冷却後、フェルターで濾過して使用。スダン�｡の溶媒である７０％アルコールにより脂肪が軟化し、アルコールに溶けた色素が脂肪中に溶け込み黄赤色に染める。　　　　　　　　　　　　　

70％アルコールとアセトンの等量混合液にスダン�｡を飽和溶解する。（２％） 使用直前に濾過して使用。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

スダン�｡1.0g、酢酸　90ml、無水エタノール10ml 濾過後使用。室温保存。　　　　　　　　　　　　　　　　　　

ズダン染色、直接は未消化の脂肪を見て、間接は未吸収の脂肪酸まで見られるとのことです。染色液に、３６％酢酸を加える 。

糞便中の真菌の証明

１．糞便を清浄なスライドガラスに塗抹後、乾燥させずに固定。 （固定液としてホルマリンか純エタノールを用いる。固定液をマウントしてもよいが、その場合は乾燥に注意。固定時間は10分間以上、１晩放置可。）

２．0.5％の過ヨウ素酸水溶液をスライドガラス上にマウント後、5分間反応。

３．スライドガラスを傾斜させて過ヨウ素酸を軽く流し落とし、水洗せずに、シェフ試薬を滴下する。20分反応。

４．静かに水洗する。水道水でよいが、水は検体をむった部分に直接落とさず、ガラスのふちから静かに流すようにする。

５．乾燥させずに、そのままカバーガラスをかけて鏡顕する。ただし、この状態は乾燥しやすく標本を保存できない。保存用は、水溶性封入剤。（グリセリンなど）で封入するか、脱水透徹後に非水溶封入剤で封入する。 注意１：PAS反応で陽性（赤紫色）になるものは真菌以外にもあるので、必ず形態観察を併用する。そ嚢液や糞便の鏡検でPAS反応で陽性になるものは、ヘテロヒィル顆粒、餌の成分、粘液、腸内の細菌類などであり、いつぽう陰性のものは赤血球の細胞質などがある。 注意２：過ヨウ素酸は市販品。溶液は長持ちしないので、粉末を少量ずつ小分けしておいて使用時に水に溶かす。 注意３：シェフ試薬も市販品。冷蔵庫にいれておけば、かなりもつ。 結果：PAS陽性＝赤紫色

和光純薬製NMBをO.1g計る。 100mlの生理食塩水に溶かす。 ホルマリンを1ml入れる。 濾過（0.45μｎ）して褐色瓶に入れて冷蔵。 濾過して小型の褐色スポイド瓶にいてる。 注意　濾過はコーヒーヒィルター２枚でも可能。　

フェイバーG（ニッスイ）の使用法　　　　　

臨床材料、新鮮分離菌を用意 　　　　　　　

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よく洗浄したスライドグラスに菌を塗末した後、よく乾燥します。 肉眼的に塗ったことがわからない程、薄く塗るのがこつ。 　　　　　　　　　　　　　　

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火炎またはメタノール固定をおこないます。 炎に2-3回出し入れする。こがさないように。 　　　　　　　　　　　　　　　�ﾖ

染色液A（ビクトリアブルー）を検体状に十分滴下し約１分間放置します。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　�ﾖ 　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　水洗 　　　　　　　　　　　　　　

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脱色液を注ぎ染色液Aの青色が溶け出さなくなるまで、数回繰り返す。青が残るようなら不十分。塗末が厚いと青が残るので薄く塗末すること。 　　　　　　　　　　　　　　　

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　　　　水洗 　　　　　　　　　　　　　　　　

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染色液Ｂのフクシンまたはサフラニンを滴下して１分間放置。

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　　　　水洗 　　　　　　　　　　　　　　　　

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　　　　乾燥 　　　　　　　　

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鏡顕 室温保存、１年間。セット販売なし。１本ずつ購入。

ACT（≒APTT）測定

APTTとは 1・凝固因子の不足 2・血小板の数や欠陥の異常 を意味する。

方法

1・2ml採血。珪藻土は凝固を活性化。

2・37度ウエットバスまたは口腔に入れる。

3・60秒・90秒・120秒で固まりをみる。 正常 犬は2分未満。猫は65秒未満。 兔1　1才　ダッチ種　120秒

備考 1ml採血場合は自己でデーターを作ること

凝固が延長していて血小板が正常。稟告でアスピリンを飲んでいない。外に出ない（クマリン誘導体摂取なし）なければ、APTTに異常がある。 VWF因子の異常でも反応あることもある。 1本40円　1000本単位　購入に3ヶ月かかる 。

　メイ・グリュンワイド液をスライドガラス全面 に塗る。pH6.4のバッファー１mlに対してギムザ原液を1-2滴混合する。（１枚に対して３ｍｌ必要）

メイ・グリュンワイド液で固定。3-5分。スライドガラス全面 に盛る。

洗浄、洗浄瓶を使用してスライドガラスの端から水を注ぎ、一気に押し出すように染色液を出す操作を３回繰り返す。

希釈ギムザをスライドガラス全面に塗る。5-20分。

洗浄、洗浄瓶を使用してスライドガラスの端から水を注ぐ動作を３回繰り返す。２回目は塗抹面 に塗った後、１分間放置して分別する。

濾紙上に塗抹面を下にして置き、上から別の紙で押さえ込む水分を吸い取る。

エタノールで15分は最低固定。

ラピットスプレー（武藤化学）をかけて、専門の染色機関で染色をおこなってもらう。

組織が何十にもなっているとき、離れてみやすい。扁平上皮癌のときなど有効。

ジアルジアの検出に有効

１回の検査陰性では除外不能 比重計で1.112にする。

ELISA、IFAと比べても検出率は同等 飽和食塩水よりシストの検出はしやすい。

6-7倍 違う便で2-3回検査を繰り返すと検出率上昇 50%硫酸亜鉛（SG1.112）の作成

50％（W/W）なら50gと水100ml 33％（W/W）なら33gと水100mlを加える。

方法

糞便0.5gを水2-3mlに溶解 水をくわれて10mlに。

ガーゼで濾過 。濾液を2000ｒｐｍで２分遠心 上清はすてる。

沈渣を50%硫酸亜鉛（SG1.112）で溶解。（上から2cm位まで加える） 2000ｒｐｍで２分遠心。 液面からサンプリング、鏡検する。